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NEB助力新型冠狀病毒 2019-nCoV 快速診斷與研究

2020/3/20 13:19:14??????點(diǎn)擊：


    在 21 世紀(jì)的第一個(gè)十年，非典爆發(fā)。2003 年 7 月的數(shù)據(jù)顯示，SARS 病毒在全球 27 個(gè)國(guó)家造成了 8096 例感染病例，774人死亡。十年后，MERS 病毒引起的中東呼吸綜合征，又在 27 個(gè)國(guó)家?guī)?lái)了 1728 例確診病例，奪走了 624 條生命。


    2020 年關(guān)將至，冠狀病毒再一次洶涌襲來(lái)。2019 年 12 月 30 日，武漢市衛(wèi)生健康委員會(huì)醫(yī)政醫(yī)管處發(fā)布《關(guān)于做好不明原因肺炎救治工作的緊急通知》，通知稱武漢部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)陸續(xù)出現(xiàn)不明原因肺炎病人，臨床表現(xiàn)均表現(xiàn)為病毒性肺炎或肺部感染。2020 年伊始，在科研人員的快速應(yīng)對(duì)下，檢出一種新型冠狀病毒，并獲得該病毒的全部基因組序列。世界衛(wèi)生組織正式將造成武漢不明原因肺炎疫情的新型冠狀病毒命名為：2019-nCoV。


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  十七年前抗擊 SARS 的領(lǐng)軍人物鐘南山院士以 83 歲高齡再次掛帥出征，于昨日接受央視采訪時(shí)指出，目前已能肯定新型的冠狀病毒能“人傳人”。幾個(gè)小時(shí)前，武漢市衛(wèi)健委也發(fā)布消息，指出“武漢共有 15 名醫(yī)務(wù)人員確診為新型冠狀病毒感染的肺炎病例”。鐘南山院士表示：當(dāng)前防控最有效的辦法就是早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早隔離。


  從首例新型肺炎報(bào)告后的第 14 天，世界衛(wèi)生組織（WHO）宣布，已收到中國(guó)分享的從武漢不明原因病毒性肺炎病例中檢測(cè)到的新型冠狀病毒基因序列信息。到基因序列公布后的 1~2 天里，若干診斷公司根據(jù)病毒的 RNA 序列，先后宣布完成了新型冠狀病毒檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)。這些均得益于目前先進(jìn)的測(cè)序手段及快速的診斷方法。當(dāng)前，對(duì)冠狀病毒的診斷測(cè)試包括 RT-PCR，實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄 PCR（rRT-PCR），逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增（RT-LAMP）以及實(shí)時(shí) RT-LAMP。1 月 17 日，WHO 針對(duì)發(fā)布了新型冠狀病毒診斷方案：Diagnostic detection of 2019-nCoV by real-time RT-PCR（Charité Virology, Berlin, Germany）。

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   近期，快速的診斷方案使各地新增病例得到快速確診，這增加了大家對(duì)疾病的警惕和防護(hù)，也可使流行病學(xué)監(jiān)測(cè)高效進(jìn)行，以采取有效的預(yù)防措施和實(shí)施適當(dāng)?shù)目共《局委?。?duì)于新型冠狀病毒的深入研究和快速診斷方案，NEB 作為分子生物學(xué)領(lǐng)域的頭部供應(yīng)商，能夠提供從病原體核酸提取，到二代測(cè)序建庫(kù)、RT-qPCR 和 RT-LAMP 診斷試劑的一整套完整解決方案。


01  核酸提取






貨號(hào)

名稱

規(guī)格

T2010S

Monarch Total RNA Miniprep Kit

50 preps


  • 全能：集樣本保存、細(xì)胞裂解、gDNA 去除為一體
  • 廣泛適用：適用于培養(yǎng)細(xì)胞、血液、哺乳動(dòng)物組織和病毒，及難裂解樣本，如細(xì)菌、酵母和植物。
  • 高質(zhì)量：A260/280 和 A260/230 比值均≥1.8，高 RIN 值和極低 gDNA 殘留（gDNA 去除柱和 DNase I）。
  • 高效：可純化總 RNA 包含小 RNA，通過(guò)改變結(jié)合條件可以選擇性地篩選＜200 nt 的 RNA，包含 miRNA、5S rRNA 和 tRNA。
  • 下游應(yīng)用：提取純化得到的 RNA 可用于 RT-qPCR、cDNA 合成、RNA-seq、Northern blot 分析等下游實(shí)驗(yàn)。


02   RT-qPCR



貨號(hào)

名稱

規(guī)格

E3005E

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

2500 rxns

E3005L

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

500 rxns

E3005S

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

200 rxns

E3005X

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

1000 rxns

E3006E

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

2500 rxn

E3006L

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

500 rxns

E3006S

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

200 rxns

E3006X

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

1000 rxns

M0372L

Antarctic Thermolabile UDG

500 units

M0372S

Antarctic Thermolabile UDG

100 units

M0280L

Uracil-DNA Glycosylase (UDG)

5,000 units

M0280S

Uracil-DNA Glycosylase (UDG)

1,000 units


  • 使用簡(jiǎn)便：每個(gè)產(chǎn)品對(duì)應(yīng)一種應(yīng)用，方便的預(yù)混液形式及易操作的實(shí)驗(yàn)步驟
  • 性能優(yōu)異：Luna 系列產(chǎn)品經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的優(yōu)化及檢測(cè)以確保特異性、靈敏度、精確性及可重復(fù)性
  • 防污染：預(yù)混液中包含 dUTP，qPCR 前使用 NEB 的南極熱敏 UDG （NEB#M0372）或 UDG（NEB#M0280）進(jìn)行預(yù)處理以防止產(chǎn)物殘留污染。
  • 避免加樣誤差：肉眼可見(jiàn)的藍(lán)色惰性示蹤染料，避免加樣失誤
  • 室溫建立體系：溫啟動(dòng)的反轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動(dòng) Taq 酶共同提升了反應(yīng)特異性和穩(wěn)定性
*已有大型診斷公司采購(gòu) Luna 系列的 E3006 進(jìn)行新型冠狀病毒檢測(cè)試劑盒的研發(fā)。


03   等溫?cái)U(kuò)增

聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是特定 DNA 擴(kuò)增技術(shù)，已被廣泛應(yīng)用。然而，PCR 需要反應(yīng)混合物在不同溫度之間重復(fù)循環(huán)才能實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，因此，在分子生物學(xué)和分子診斷實(shí)驗(yàn)室中還有其他序列特異性擴(kuò)增方法，也像 PCR 技術(shù)一樣常被使用。這些替代方法通常不需要改變反應(yīng)溫度，因此被稱為等溫?cái)U(kuò)增。等溫?cái)U(kuò)增方案多種多樣，并各具優(yōu)勢(shì)。NEB 提供品類齊全的等溫?cái)U(kuò)增系列產(chǎn)品，全面滿足等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)試劑盒的研發(fā)及生產(chǎn)。


貨號(hào)

名稱

規(guī)格

M0275L

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

8,000 units

M0275M

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

8,000 units

M0275S

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

1,600 units

M0275V

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

800 units

M0328S

Bst DNA Polymerase, Full Length

500 units

M0374L

Bst 3.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0374M

Bst 3.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0374S

Bst 3.0 DNA Polymerase

1,600 units

M0537L

Bst 2.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0537M

Bst 2.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0537S

Bst 2.0 DNA Polymerase

1,600 units

M0538L

Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase

8,000 units

M0538M

Bst 2.0 WarmStart? DNA Polymerase

8,000 units

M0538S

Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase

1,600 units

M0330L

Bsu DNA Polymerase, Large Fragment

1,000 units

M0330S

Bsu DNA Polymerase, Large Fragment

200 units

E1700L

WarmStart LAMP Kit (DNA & RNA)

500 rxns

E1700S

WarmStart LAMP Kit (DNA & RNA)

100 rxns

M1800L

WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA)

500 rxns

M1800S

WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA)

100 rxns

M0249L

RecA

1,000 ug

M0249S

RecA

200 ug

M2401S

ET SSB

50 ug

M0300L

T4 Gene 32 Protein

500 ug

M0300S

T4 Gene 32 Protein

100 ug


04  反轉(zhuǎn)錄


針對(duì) RNA 病毒檢測(cè)的反轉(zhuǎn)錄步驟，NEB 提供高靈敏度、適應(yīng)不同溫度、以及更低起始量的一系列反轉(zhuǎn)錄酶及試劑盒。


貨號(hào)

名稱

規(guī)格

E5310S

OneTaq RT-PCR Kit

30 rxns

E5315S

OneTaq One-Step RT-PCR Kit

30 rxns

E6300L

ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit

150 rxns

E6300S

ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit

30 rxns

E6560L

ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit

150 rxns

E6560S

ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit

30 rxns

M0253L

M-MuLV 

Reverse Transcriptase

50,000 units

M0253S

M-MuLV 

Reverse Transcriptase

10,000 units

M0277L

AMV 

Reverse Transcriptase

1,000 units

M0277S

AMV 

Reverse Transcriptase

200 units

M0368L

ProtoScript II 

Reverse Transcriptase

10,000 units

M0368S

ProtoScript II Reverse Transcriptase

4,000 units

M0368X

ProtoScript II 

Reverse Transcriptase

400,00 units

M0380L

WarmStart RTx Reverse Transcriptase

250 rxns

M0380S

WarmStart RTx Reverse Transcriptase

50 rxns

S1230S

Random Primer 6

1.0 A260 units

S1254S

Random Primer 9

1.0 A260 units

S1316S

Oligo d(T)18 mRNA Primer

5.0 A260 units

S1327S

Oligo d(T)23 VN

1.0 A260 units

S1330S

Random Primer Mix

100 μl (60 μM)


05  二代測(cè)序


2003 年 4 月 14 日，SARS 病毒樣本在華大基因?qū)嶒?yàn)室完成 RNA 測(cè)序，此時(shí)距離首例感染病例的發(fā)現(xiàn)已過(guò)去了 100 多天。而此次，距離首例新型肺炎報(bào)告僅 14 天，WHO 已收到新型冠狀病毒基因序列信息。這得益于 16 年間二代測(cè)序技術(shù)的蓬勃發(fā)展和中國(guó)醫(yī)療工作者的不斷開(kāi)拓。
NEB 公司擁有十年開(kāi)發(fā)二代測(cè)序建庫(kù)產(chǎn)品的經(jīng)驗(yàn)，NEBNext 系列產(chǎn)品不斷在簡(jiǎn)化工作流程、最小起始量、更高的文庫(kù)產(chǎn)量和質(zhì)量等方面進(jìn)行優(yōu)化，助力更多科研工作者針對(duì)病毒樣本進(jìn)行深入研究。
NEBNext 單細(xì)胞/超低起始量 RNA 文庫(kù)制備試劑盒（NEB #E6420）可直接從單個(gè)細(xì)胞或 2 pg-200 ng 的 RNA 構(gòu)建成全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本的高質(zhì)量文庫(kù)。優(yōu)化的cDNA 合成 & 擴(kuò)增模塊（NEB #E6421）包含模板轉(zhuǎn)換，可單管完成從細(xì)胞裂解到 cDNA 的全部實(shí)驗(yàn)流程。同時(shí)該試劑盒中的 NEBNext Ultra? II FS DNA 文庫(kù)制備試劑盒（NEB #E7805、E6177）可用于逆轉(zhuǎn)錄后的病毒 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建，并提供 DNA 片段化試劑，將 DNA 片段化、末端修復(fù)和加 dA 尾優(yōu)化到一步，可在單管中完成，省去了繁瑣的純化步驟，進(jìn)一步防止病毒樣品損失。


貨號(hào)

名稱

規(guī)格

E6420S/L

NEBNext 單細(xì)胞/超低起始量 RNA 文庫(kù)制備試劑盒

24/96 rxns

E6421S/L

NEBNext 單細(xì)胞/超低起始量 cDNA 合成 & 擴(kuò)增模塊

24/96 rxns

E7805S/L

NEBNext Ultra II FS DNA 文庫(kù)制備試劑盒 - 含片段化酶

24/96 rxns

E6177S/L

NEBNext Ultra II FS DNA 文庫(kù)制備試劑盒 - 含片段化酶/含純化磁珠

24/96 rxns


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溫馨提示：病毒流感高發(fā)期，請(qǐng)務(wù)必注意個(gè)人衛(wèi)生，勤洗手，保持居住環(huán)境的清潔，多開(kāi)窗通風(fēng)，盡量少去人多密集的公共場(chǎng)所，出門(mén)記得戴口罩。





北京百靈克生物科技有限責(zé)任公司
公司地址：北京海淀區(qū)永定路88號(hào)長(zhǎng)銀大廈9C05
咨詢熱線：010-58895880/58896088
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